Fundamento
Para el análisis de la vía clásica del complemento se puede utilizar la cuantificación de la actividad hemolítica del complemento sérico, mediante la técnica CH50.
Técnica
1. Preparar los eritrocitos de carnero (E):
- Lavar 5 ml de eritrocitos de carnero con PBS y resuspenderlos en 15 ml de tampón barbital para CH50 en un tubo de 25 ml.
- Homogeneizar la suspensión de E y transferir 0,5 ml a un tubo con 12,5 ml de agua destilada para lisar los eritrocitos.
- Leer la absorbancia de la solución a 540 nm frente a un blanco de agua destilada.
La absorbancia debe ser 0,50.
Suponemos que se obtiene una absorbancia de la primera lisis de 0,75. Sabiendo que la absorbancia de una suspensión al 6% es de 0,50, se calcula cuál es la concentración que corresponde a la absorbancia obtenida.
Teniendo en cuenta la relación entre diluciones se calcula el volumen final que debe tener la suspensión de eritrocitos para ajustar la concentración al 6%
14,5ml / 9% = 𝚅´6%
𝚅´= 21,75 x ⥴ 22 ml
Será necesario diluir con tampón barbital los 14.5 del tubo original de 25 ml para llevarlos hasta 22 ml
2. Sensibilizar los eritrocitos con anticuerpos (EA).
3. Preparación de las diluciones de suero problema.
4. Cálculo de los resultados.
4. Cálculo de los resultados.
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